ANÁLISE FITOQUÍMICA E ATIVIDADE INSETICIDA DE ANNONA MONTANA SOBRE AEDES AEGYPTI

Abstract

RESUMO: Entre as várias doenças transmitidas por insetos, o Aedes aegypti configura como principal vetor de transmissão dos vírus da dengue, febre amarela, chikungunya e zika. Dados da Organização Mundial de Saúde classificam a dengue como um dos principais agravantes da saúde pública no mundo, onde, anualmente, estima-se que ocorrem 50 a 100 milhões de casos produzidos pelos quatro sorotipos diferentes, em mais de 100 países, de todos os continentes, com exceção da Europa. Estudos têm mostrado que a utilização de plantas e de seus derivados como repelente e inseticida é tão antiga quanto a civilização humana, com relatos em sistemas milenares no mundo todo, como China, Índia e Tibet. Neste contexto, esta pesquisa teve como principal objetivo realizar análise fitoquímica do extrato etanólico das folhas e sementes de Annona montana, bem como identificação e quantificação de classes de metabólitos secundários, além de avaliar a atividade inseticida sobre o vetor Aedes aegypti. O extrato foi obtido por meio de maceração em etanol, e as frações foram obtidas em solventes orgânicos por partição líquido-líquido (hexano, clorofómio, acetato de etila e metanol) em ordem crescente de polaridade. Pelo screening fitoquímico foi possível identificar a presença de alcaloides, taninos, cumarinas, saponinas, flavonoides, quinonas, triterpenos e esteróides. Na triagem fitoquímica o teor de polifenóis, flavonoides, taninos e alcaloides foi determinado com base em métodos espectrofotométricos, onde foi possível quantificar polifenóis (folhas= 249 μg/g, sementes= 102 μg/g) flavonoides (folhas= 101 μg/g, sementes= 89 μg/g) e alcaloides (folhas= 0,296 μg/g, sementes= 0,346 μg/g), não sendo possível quantificar taninos por conta dos limites de detecção e quantificação que foram menores do que o esperado. As frações metanólicas tanto das sementes como das folhas foram submetidas à análise de HPLC por meio de gradiente de eluição, no qual foi utilizado o método de gradiente acetonitrila/água (8:2), e metanol/água (8:2) cuja melhor resposta apresentou-se na fração da semente, com tempo de retenção entre 2,5 e 25 minutos, característico da presença de acetogeninas. Foram realizados ensaios para verificar a bioatividade do extrato e das frações, neste sentido a fração metanólica das sementes de A. montana, foi a que apresentou maior efeito inseticida para o controle das larvas de A. egypti, em comparação com os demais tratamentos. A fração metanólica teve melhor resultado de mortalidade por via de ingestão (100%), quando comparado ao contato por superfície contaminada (50%). A concentração letal 90% (CL90 24h= 20,978 ug/ml; CL90 48h= 10,356 ug/ml ), apresentou maior mortalidade para o teste de ingestão e contato. Considerando-se os resultados obtidos, nas condições do presente estudo, pôde se concluir que a fração em metanol das semente de A. montana, do extrato em etanol obtido por partição líquido-líquido é promissor para elaboração de formulações capazes de promover efeito inseticida, propiciando níveis satisfatórios de controle. Entretanto é fundamental analisar a fitoquímica das frações, determinando qual o princípio ativo mais atuante na mortalidade dos insetos, bem como avaliar a toxicidade das frações a fim de tornar os resultados deste estudo em um produto comercialmente viável. ABSTRACT: Among the various diseases transmitted by insects, Aedes aegypti is the main transmission vector of dengue virus, yellow fever, chikungunya and zika. Data from the World Health Organization classify dengue as one of the major aggravators of public health in the world, where an estimated 50 to 100 million cases are produced annually by the four different serotypes in more than 100 countries of all continents, with the exception of Europe. Studies have shown that the use of plants and their derivatives as a repellent and insecticide is as old as human civilization, with reports in millenarian systems around the world, such as China, India and Tibet. In this context, this research had as main objective to perform phytochemical analysis of the ethanolic extract of leaves and seeds of Annona montana, as well as identification and quantification of classes of secondary metabolites, besides evaluating the insecticidal activity on the Aedes aegypti vector. The extract was obtained by maceration in ethanol, and the fractions were obtained in organic solvents by liquid-liquid partition (hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol) in increasing order of polarity. Through phytochemical screening it was possible to identify the presence of alkaloids, tannins, coumarins, saponins, flavonoids, quinones, triterpenes and steroids. In the phytochemical evaluation, polyphenols, flavonoids, tannins and alkaloids were determined based on spectrophotometric methods, where it was possible to quantify flavonoids polyphenols (leaves = 249 μg / g, seeds = 102 μg / g) seeds = 89 μg / g) and alkaloids (leaves = 0.296 μg / g, seeds = 0.346 μg / g), it was not possible to quantify tannins because of the limits of detection and quantification that were lower than expected. The methanol fractions of both seeds and leaves were subjected to HPLC analysis by means of an elution gradient in which the acetonitrile / water (8: 2) gradient method and methanol / water (8: 2) gradient response occurred in the seed fraction, with retention time between 2.5 and 25 minutes, characteristic of the presence of acetogenins. In order to verify the bioactivity of the extract and the fractions, the methanolic fraction of the A. montana seeds was the one with the highest insecticidal effect for the control of the A. egypti larvae, in comparison to the other treatments. The methanolic fraction had a better mortality result through ingestion (100%), when compared to contaminated surface contact (50%). The 90% lethal concentration (CL90 = 20.978 ug/ml) presented higher mortality for the ingestion and contact test. Considering the results obtained, in the conditions of the present study, it was possible to conclude that the methanol fraction of the A. montana seed from the ethanol extract obtained by liquid-liquid partition is promising for formulations capable of promoting insecticidal effect, providing satisfactory levels of control. However, it is fundamental to analyze the phytochemistry of the fractions, determining the most active active principle in insect mortality, as well as to evaluate the toxicity of the fractions in order to make the results of this study a commercially viable product.