EFEITO GASTROPROTETOR DO ACETURATO DE DIMINAZENO, UM ATIVADOR DA ENZIMA CONVERSORA DE ANGIONTENSIONA II, EM ROEDORES: papel da via ang (1-7) / receptor MAS

Abstract

RESUMO: A via da Enzima Conversora de Angiotensina II (ECA II) foi relacionada recentemente a vários efeitos benéficos no organismo, dentre eles a gastroproteção. A ECA II é responsável por converter a Angiotensina II em um peptídeo ativo denominado Angiotensina 1-7 (Ang (1-7)) que por sua vez se liga a um receptor acoplado a proteína G, o receptor MAS. Estudos atuais demonstram que o Aceturato de Diminazeno (DIME), um tripanossomicida utilizado em animais, foi descrito como um agente ativador de ECA II. Dessa forma, o referido trabalho objetivou avaliar o efeito gastroprotetor do DIME, pela via Ang (1-7)/Receptor MAS, em lesões gástricas induzidas por etanol e ácido acético em roedores. Para avaliar o efeito gastroprotetor do DIME na lesão aguda por etanol, os animais foram pré-tratados por gavagem e divididos nos seguintes grupos: grupo controle, pré-tratado somente com salina; DIME nas doses de 0,7 mg/Kg, 2 mg/Kg, 7 mg/Kg (melhor dose) e 20 mg/kg; ou omeprazol (10mg/kg). Após uma hora foi administrado etanol 50% (0,5ml/25g), e ao término dessa hora os animais foram eutanasiados e o estômago retirado e imediatamente aberto ao longo da curvatura maior para análise. Foram retiradas amostras de tecido para a análise histológica, a dosagem de glutationa reduzida (GSH) e malondialdeído (MDA). Para a análise cicatrizante do DIME na lesão crônica induzida por ácido acético os animais foram anestesiados com Xilazina (5mg/kg) e Cetamina (60mg/kg) e em seguida foi realizada a laparotomia, o estômago foi exposto e o ácido acético 40% (100μL/1min) foi administrado na parte serosa do estômago. Os animais foram tratados a partir do 2º dia até o 7º dia após a lesão. Os grupos foram tratados com: salina; DIME (7mg/kg); A-779 (5mg/Kg, antagonista seletivo do receptor MAS); A-779 + DIME; ou omeprazol (10mg/kg). O grupo controle não recebeu a administração de ácido acético e foi tratado somente com salina. Ao término do sétimo dia, os animais foram eutanasiados, o estômago retirado e imediatamente aberto para a realização das análises. Foram retirados tecidos para a análise histológica, atividade de mieloperoxidase (MPO), teste de colágeno, imunohistoquímica e citocinas (TNFα, IL-6 e IL-10). Além disso, foram realizados experimentos sobre a fisiologia gástrica como muco e secreção gástrica. Assim como foi avaliado os níveis do peptídeo Ang(1-7) em ambos os modelos de lesão gástrica. Os resultados obtidos indicam que o DIME tem capacidade gastroprotetora em modelo agudo e crônico, com capacidade de promover melhora do processo de re-epitelização e cicatrização da mucosa gástrica. Sugere-se que esta ação envolve em parte, o restabelecimento dos mecanismos antioxidantes com elevação dos níveis de GSH e diminuição dos níveis gástricos de MDA, diminuição da à atividade de MPO na área da lesão, elevação do muco aderido à mucosa gástrica, diminuição dos níveis de secreção gástrica, além do reestabelecimento da camada de colágeno do Tipo I no grupo tratado com DIME. Os níveis de Ang (1-7) se elevaram em ambos os modelos de lesão gástrica. Esses efeitos gastroprotetores foram abolidos quando administrado o antagonista seletivo para o receptor MAS (A-779). Com isso, conclui-se que, o DIME preveniu e promoveu cicatrização em modelos de lesões gástricas, e que sua proteção se dá, dentre outros fatores, pela elevação dos níveis de Ang (1-7) se ligando a receptores do tipo MAS. Portanto, o DIME pode, futuramente, se tornar uma nova alternativa farmacológica no tratamento de úlceras gástricas. ABSTRACT: The Angiotensin II Enzyme Converting Enzyme (ECA II) pathway has recently been linked to several beneficial effects in the body, including gastroprotection. ECA II is responsible for converting Angiotensin II into an active peptide called Angiotensin 1-7 (Ang (1-7) which in turn binds to a G protein-coupled receptor, the MAS receptor. Studies demonstrate that Diminazene Aceturate (DIME), , has been described as an ECA II activating agent. Thus, the objective of this work was to evaluate the gastroprotective effect of DIME, via Ang (1-7) / MAS Receptor, on gastric lesions induced by ethanol and acetic acid in rodents. To evaluate the gastroprotective effect of DIME on acute ethanol injury, the animals were pretreated by gavage and divided into the following groups: control group, pretreated with saline only; DIME at doses of 0.7 mg / kg, 2 mg / kg, 7 mg / kg (best dose) and 20 mg / kg; or omeprazole (10mg / kg). After one hour 50% ethanol (0.5ml / 25g) was administered, and at the end of that time the animals were euthanized and the stomach removed for analysis. Tissue samples were taken for histological analysis, reduced glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA). The animals were anesthetized with Xylazine (5mg / kg) and Ketamine (60mg / kg) for laparotomy, the stomach was exposed and the acetic acid was 40% ( 100μL / 1min) was given to the serous part of the stomach. The groups were treated with: saline; DIME (7mg / kg); A-779 ; A-779 + DIME; or omeprazole (10mg / kg). The control group received no acetic acid and was treated with saline only, in the seventh day, the animals were euthanized, the stomach removed for the analysis. Tissue for histological analysis, myeloperoxidase activity (MPO), collagen test, immunohistochemistry and cytokines (TNFα, IL-6 and IL-10) were collected. In addition, experiments were performed on gastric physiology such as mucus and gastric secretion. As well as evaluating Ang (1-7) peptide levels in both gastric lesion models. It is suggested that this action involves, in part, restoration of antioxidant mechanisms with elevation of GSH levels and decrease of gastric MDA levels, decrease in MPO activity in the lesion area, elevated mucus adhered to the gastric mucosa, decreased levels of gastric secretion, as well as the reestablishment of the Type I collagen layer in the DIME treated group. Ang (1-7) levels were elevated in both models of gastric lesion. These gastroprotective effects were abolished when administered the MAS selective antagonist (A-779). Thus, it is concluded that DIME prevented and promoted healing in models of gastric lesions, and that its protection is given, among other factors, by raising Ang (1-7) levels by binding to MAS type receptors. Therefore, DIME may, in the future, become a new pharmacological alternative in the treatment of gastric ulcers.