EFICIÊNCIA DO DILUENTE TRIS SUPLEMENTADO COM ÓLEO DE MAURITIA FLEXUOXA SOBRE A QUALIDADE DO SÊMEN CAPRINO APÓS CRIOPRESERVAÇÃO

Abstract

RESUMO: O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos do uso do Tris suplementado com óleo de Mauritia Flexuoxa como diluentes para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados quatro caprinos, com idade média de 4 anos, clinicamente saudáveis e com escore de condição corporal 3,5 numa escala de (0-5). Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (capim elefante), concentrado (ração peletizada, 300g/ animal/ dia) e sal mineral a vontade. Foi coletado 64 ejaculados dos quatro bodes utilizados. A coleta do sêmen foi realizada com o auxílio de uma vagina artificial específica para pequenos ruminantes, pré-aquecida a uma temperatura média de 39ºC e acoplada a um tubo coletor graduado recomendada pelo manual do CBRA (2013). Foram realizadas coletas em duas etapas. Primeiro foi realizado um teste de toxicidade no total de trinta e duas coletas, sendo oito ejaculados de cada animal, os ejaculados foram avaliados com a adição de 5%, 10%, 15%, 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentração que apresentou o melhor resultado. Logo após, foram realizadas mais trinta e duas coletas, que foram diluídos em Tris-gema-glicerol (grupo controle) GC ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa) GB. As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Posteriormente, as palhetas foram imersas em nitrogênio líquido (-196 °C) e armazenadas em botijões criogênicos. Após o período mínimo de uma semana as partidas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos tipo ependorf e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida foram avaliadas as integridades do acrossomo, através de sondas florescentes (FITC-PNA), membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceina e Iodeto de Propideo) e função mitocondrial (JC-1) sob microscopia de epiflurescencia. Os dados foram analisados empregando-se o programa BIOESTAT 5,0. Foram realizadas as análises estatística através do software SAS (ANOVA) e para comparação de médias usado o teste de Tukey a 5%. ABSTRACT: The aim of this study was to investigate the effects of Tris use supplemented with Mauritia Flexuoxa oil as thinners for goat semen cryopreservation. four goats were used, with an average age of 4 years old, clinically healthy and body condition score 3.5 on a scale of (0-5). The animals were fed daily with roughage (elephant grass), concentrate (pelletized feed, 300g / animal / day) and mineral salt will. Totaling 64 ejaculates of the four goats used. The semen collection was performed with the aid of a specific artificial vagina to small ruminants, preheated to an average temperature of 39 ° C and coupled to a collector tube graduate recommended by the CBRA manual (2013). Sampling was carried out in two stages. First we conducted a toxicity test in total of thirty-two samples, eight ejaculates from each animal, the ejaculates were evaluated with the addition of 5%, 10%, 15%, 20% diluent Mauritia oil based flexuoxa . After the toxicity test, the concentration was chosen that showed the best result. Soon after, most were held thirty-two collections, which were diluted in Tris-egg yolk-glycerol (control group) or GC diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa) GB. Samples were cryopreserved with the aid of Tk3000® device. Subsequently, the vanes raqueadas were immersed in liquid nitrogen (-196 ° C) and stored in cryogenic cylinders. After the minimum period of one week matches were thawed in a water bath at 37 ° C for 30 seconds, put up in microtubules Ependorf and homogenised for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then we assessed the integrity of the acrosome through fluorescent probes (FITC-PNA), plasma membrane (Carboxifluresceina diacetate and propidium iodide) and mitochondrial function (JC-1) under microscopy epiflurescencia.