EFEITO PROTETOR DO LACTOBACILLUS REUTERI DSM 17 938 NA LESÃO GÁSTRICA INDUZIDA POR ETANOL EM CAMUNDONGOS: papel da inibição do receptor trpv1

Abstract

RESUMO: O etanol tem a capacidade de lesar diretamente a mucosa gástrica, e um dos mecanismos pelos quais ele causa este dano é através da ativação dos receptores de potencial transitório do tipo vanilóide 1 (TRPV1), liberação de Substância P (SP) e ativação do receptor de neuroquinina tipo 1 (NK1). Algumas bactérias ácido- lácticas e seus produtos possuem atividade gastroprotetora em lesões induzidas pelo etanol, com diminuição dos níveis de SP. Além disso, a estirpe DSM 17938 do Lactobacillus reuteri, exibe atividades terapêuticas por meio da inibição do TRPV1. Assim, este estudo avaliou o efeito do Lactobacillus reuteri nas lesões gástricas induzidas por etanol e seu possível mecanismo de ação. Camundongos swiss (25- 30g) foram pré-tratados oralmente com solução salina (0,9%) ou 108 UFC de Lactobacillus reuteri por 3, 7 e 14 dias. No quarto, oitavo e décimo quinto dia, os animais suplementados com Lactobacillus reuteri e solução salina receberam etanol a 50% (0,5 mL / 25 g v.o.) ou solução salina. Para avaliar o papel da inibição da ativação do TRPV1 ou do NK1, os camundongos suplementados com Lactobacillus reuteri receberam capsaicina ou resiniferatoxina (3 nmol/kg) via oral com etanol a 50%, e 1 μmol/L para 20 g, via i.p. de SP no quarto dia, respectivamente. As amostras de cada estômago foram removidas para avaliação macroscópica, histopatológica e análises bioquímicas (Malondialdeído-MDA, Nitrito- Nox, Glutationa-GSH e Superóxido dismutase-SOD). Foi realizada imuno-histoquímica para TRPV1, e a concentração de substância P foi mensurada por ELISA. Também foi avaliado o muco aderido à parede gástrica e a secreção ácida. Lactobacillus reuteri reduziu o dano gástrico induzido pelo etanol (P <0,001). 3 dias de pré- tratamento com Lactobacillus reuteri apresentou taxa de inibição da lesão de 90,26%. Lactobacillus reuteri também reduziu os níveis de MDA e nitrito quando comparado ao grupo lesado (P<0,01) e manteve os parâmetros antioxidantes basais de GSH e SOD (P <0,001). Os efeitos da suplementação com L. reuteri foram significativamente revertidos com a administração de RTX, com aumento de MDA e Nox (P <0,001) e diminuição de GSH e SOD (P <0,0001). Lactobacillus reuteri não foi capaz de prevenir a lesão causada pela administração de SP e etanol. A expressão de TRPV1 foi significativamente menor no grupo tratado, quando comparado ao grupo lesionado. O conteúdo de substância P no tecido gástrico foi reduzido com Lactobacillus reuteri, em comparação ao grupo lesado (P<0,05). Além disso, o Lactobacillus reuteri elevou os níveis de muco na mucosa gástrica e manteve os níveis basais de secreção de ácido (p <0,05). Assim, o estudo demonstra os efeitos protetores de Lactobacillus reuteri no dano gástrico induzido pelo etanol, que em parte se dá pela inibição da ativação do receptor TRPV1, com redução de substância p e do estresse oxidativo. ABSTRACT: Ethanol has the ability to directly injure the gastric mucosa, and one of the mechanisms by which it causes gastric damage is through the activation of Transient Receptor Potential Vanilloid 1 (TRPV1), release of Substance P (SP) and activation of the neurokinin 1 (NK1) receptor. Some lactic acid bacteria and their products have gastroprotective activity in ethanol-induced lesions, with a decrease in SP levels. In addition, the DSM 17938 of Lactobacillus reuteri, exhibits therapeutic activities by inhibiting TRPV1. Thus, this study evaluated the effect of Lactobacillus reuteri on gastric lesions induced by ethanol and its possible mechanism of action. Swiss mice (25-30g) were pre-treated orally with saline solution (0.9%) or 108 CFU of Lactobacillus reuteri for 14, 7 and 3 days. On the fourth, eighth and fifteenth day, animals supplemented with Lactobacillus reuteri and saline received 50% ethanol (0.5 mL / 25 g v.o.) or saline. To evaluate the role of inhibition of TRPV1 or NK1 activation, Lactobacillus reuteri supplemented mice received capsaicin or resiniferatoxin (3 nmol / kg) orally with 50% ethanol, and 1 μmol / L for 20 g, i.p. of SP on the fourth day, respectively. Samples from each stomach were removed for histopathological evaluation and biochemical analyzes (Malondialdehyde-MDA, Nitrite, Glutathione- GSH and Superoxide dismutase-SOD). Immunohistochemistry was performed for TRPV1, and the concentration of substance P was measured by ELISA. Mucus adhered to the gastric wall and acid secretion were also evaluated. Lactobacillus reuteri has reduced gastric damage induced by ethanol (P <0.001). 3 days of pre- treatment with Lactobacillus reuteri group has shown a 90.26% ulcer inhibition rate. L. reuteri has also reduced the levels of MDA and nitrite when compared to the injured group (P <0.01) and maintained the basal antioxidant parameters of GSH and SOD (P <0.001). The effects of L. reuteri supplementation were significantly reversed with RTX administration, with increased MDA and Nitrite (P <0.001) and decreased GSH and SOD (P <0.0001). Lactobacillus reuteri was not able to prevent injury caused by the administration of SP and ethanol. TRPV1 expression was significantly lower in the treated group when compared to the injured group. The substance P content in the gastric tissue has been reduced with Lactobacillus reuteri in comparison to the damaged group (P <0.05). In addition, Lactobacillus reuteri has increased mucus levels in the gastric mucosa and maintained basal levels of acid secretion (P <0.005). Thus, the study demonstrates the protective effects of Lactobacillus reuteri on gastric damage induced by ethanol, which is partially due to the inhibition of TRPV1 receptor activation, with reduction of substance p and of oxidative stress.