EFEITO DO FITOESTRÓGENO DIOSGENINA SOBRE A FUNÇÃO CARDIOVASCULAR EM MODELO DE MENOPAUSA INDUZIDA POR OVARIECTOMIA

Abstract

RESUMO: Os fitoestrógenos, substâncias derivadas de plantas que possuem estrutura análoga ao estrógeno e surgem como uma alternativa à terapia de reposição hormonal (TRH) e menores efeitos colaterais. O presente estudo investigou o efeito do fitoestrógeno diosgenina sobre a função cardiovascular em modelo de menopausa induzida por ovariectomia. Os protocolos foram aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação com Animais (CEEA/UFPI 069/2014). Foram utilizadas 24 ratas Wistar oriundos do Biotério Experimental Setorial do NPPM/UFPI, mantidos sob condições controle de temperatura (241ºC) e ciclo claro-escuro de 12h, com livre acesso à alimentação e água. Realizou-se a ovariectomia para indução da menopausa após anestesia com cetamina (100 mg/kg) e xilazina (14 mg/kg), v.i,e administração posterior de Pencivet® ppu (0,1 mL/100g) intramuscular. Após 60 dias da cirurgia os animais sham e ovariectomizados e com regressão de estrógeno foram incluídos nesse trabalho No estudo in vivo, os animais foram anestesiados com tiopental sódico (45 mg/kg, i.p.) para procedimento cirúrgico para implantação de cateteres de polietileno (PE) na veia cava inferior e aorta abdominal. A pressão arterial e a frequência cardíaca, após administração aguda da diosgenina (25 e 50 mg/kg i.v.), foram medidas 24 h após a cirurgia através da conexão do catéter arterial a um transdutor de pressão pré-calibrado acoplado a um amplificador conectado a um micro-computador equipado com placa conversora analógico-digital. O estudo da administração oral crônica ocorreu nos grupos sham, salina, diosgenina 25 mg/kg, diosgenina 50 mg/kg e estradiol que receberam as substâncias durante 28 dias , por gavagem. A aferição da pressão arterial sistólica foi realizada por um método indireto e não-invasivo com um manguito na cauda da rata e por meio do equipamento ADInstruments ML125 NIBP, duas horas após a administração das substâncias nos intervalos de tempo 0, 7 e 28 dias após inicio do tratamento. Ao final de 28 dias de tratamento com as substâncias, realizou-se a coleta de sangue e eutanásia com sobredose anestésica para dissecção de órgãos. Para estudo in vitro, houve o isolamento, dissecção e limpeza da aorta de ratas tratadas por 7 dias com salina e diosgenina 50mg e a reatividade a FEN, ACh e NPS foram realizados. Investigou-se também o efeito vasorrelaxante da diosgenina (1ηM – 10mM) em anéis de ratas OVX não tratadas. O tratamento crônico com diosgenina não demonstrou alterações nos pesos corporal e relativo de órgãos (pulmão,coração, fígado, rins e útero) e dos parâmetros bioquímicos (FAL, ALT, AST, ureia e creatinina ) foram avaliados após o tratamento crônico, sem apresentar alterações. Além disso, a diosgenina 50mg/Kg na analise de marcadores de risco cardiovasculares : Colesterol total e c-HDL demonstraram parâmetros semelhantes ao grupo não-ovariectomizado (*p<0,05). A glicose sérica e triglicerídeos não tiveram alterações significativas em relação ao grupo sham e salina. A diosgenina promoveu redução da PAM e FC, v.i. A dose de 25mg,v.i, teve efeito hipotensor com bradicardia leve. A diosgenina 25 e 50mg/Kg, v.o, reduziu a pressão arterial sistólica durante o tratamento crônico e também a reatividade à FEN. As concentrações cumulativas do fitoestrógeno potencializaram a resposta vasorrelaxante da ACh e NPS após. A diosgenina também teve efeito vasorrelaxante em ratas não tratadas e foi abolido na presença de um inibidor da eNOS. A diosgenina 50mg/Kg (25 e 50 mg/kg) não implicou em alterações de parâmetro da MPO, porém elevou significativamente(*p<0,05). os níveis de GSHNP, SOD e NO, bem como reduziu a concentração de MDA relacionado a peroxidação lipídica. Os resultados apontam que a diosgenina tem ação hipotensora aguda e crônica, anti-hipercolesterolêmica, vasorrelaxante dependente de endotélio com atuação pela via do oxido nítrico (ACh e NPS) e antioxidante com redução de peroxidação lipídica. ABSTRACT: Phytoestrogens, substances derived from plants that have similar structure to estrogen, as the Diosgenin emerge as an alternative to hormone replacement therapy (HRT) and minor side effects. This study investigated the effect of diosgenin phytoestrogen on cardiovascular function in menopausal model induced by ovariectomy. The protocols were approved by the Ethics Committee on Animal Experimentation (CEEA / UFPI 069/2014). Thirty Wistar aged 2 months were used , coming from the Experimental Animal Facility Sector of NPPM / UFPI, kept under temperature control conditions (24 ± 1 ° C) and light-dark cycle of 12 hours, with free access to food and water .The ovariectomy Menopausal induction was do after anesthesia with ketamine (100 mg / kg) and xylazine (14 mg / kg), vi, and subsequent administration Pencivet® ppu (0.1 ml / 100 g) intramuscularly. After 60 days of surgery the animals sham and ovariectomized and estrogen regression were included in this work In the in vivo study, the animals were anesthetized with sodium thiopental (45 mg / kg, ip) for surgical procedure for implantation of catheters polyethylene (PE) in the inferior vena cava and abdominal aorta. Blood pressure and heart rate after acute administration of diosgenin (25 and 50 mg /Kg i.v) were measured 24 h after the surgery via the arterial catheter connection to a pre-calibrated pressure transducer coupled to an amplifier connected to a micro-computer equipped with analog-to-digital converter board. The study of chronic oral administration occurred in the sham, saline, diosgenin 25 mg/Kg, diosgenin 50mg/Kg and estradiol receiving the substances for 28 days by oral gavage. The measurement of systolic blood pressure was performed by an indirect, non-invasive method with a cuff in the rat tail and by means of ADInstruments ML125 NIBP equipment, two hours after administration of the substance at time intervals 0, 7 and 28 days after initiation of treatment. After 28 days of treatment with the substances, there blood was collected and euthanasia with anesthetic overdose for bodies dissection. For in vitro study, there was the isolation, cleaning and dissection of the aorta of rats treated for 7 days with saline and diosgenin 50mg and reactivity FEN, NPS and ACh were performed. It also investigated the vasorelaxant effect of diosgenin (1ηM - 10mM) rings in OVX rats not treated. Chronic treatment with diosgenin showed no changes in the body and relative weights of organs (lung, heart, liver, kidneys and uterus) and biochemical parameters (ALP, ALT, AST, urea and creatinine)) were evaluated after chronic treatment without deterioration. Furthermore, diosgenin 50mg / kg in the analysis of cardiovascular risk markers: Total cholesterol and HDL-c show similar parameters to the non-ovariectomized group (* p <0.05). Serum glucose and triglyceride levels have not changed significantly compared to the sham group and saline. The diosgenin promoted reduction in MAP and HR, i.v. The dose of 25mg, saw, had hypotensive effect with mild bradycardia. Diosgenin 25 and 50mg / kg, po, reduced systolic blood pressure during chronic treatment (p <0.05) and also the reactivity to FEN. The cumulative concentrations of phytoestrogen leveraging the vasorelaxant response to ACh and NPS after. Diosgenin also had vasorelaxant effect in rats untreated and was abolished in the presence of an inhibitor of eNOS. Diosgenin 50mg / kg (25 and 50 mg / kg) did not result in MPO parameter changes, but increased significantly (* p <0.05). GSH levels, SOD and NO, and reduced MDA concentration related to lipid peroxidation. The results show that diosgenin has acute hypotensive action and chronic anti-hypercholesterolemic, endothelium-dependent asorelaxant acting by means of nitric oxide (ACh and NPS) and antioxidant with reduced lipid peroxidation.