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RESUMO: A medula óssea é considerada um dos órgãos alvos para a detecção de Leishmania spp. Estudos mostram que a presença do parasita causa alterações relevantes na hematopoiese e, por conseguinte, levando a citopenias periféricas comumente observadas em pacientes humanos e caninos com leishmaniose visceral (LV). Diante disso, o presente estudo teve como objetivos o estudo clínico, parasitológico e histológico da medula óssea de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum, classificados em assintomáticos e sintomáticos, bem como avaliar o efeito do tratamento com alopurinol na medula óssea e na resposta clínico-laboratorial de cães naturalmente infectados por L. infantum. Nesse contexto, foram utilizados inicialmente quarenta e seis cães classificados de acordo com o escore clínico: assintomáticos (n=9), sintomáticos (n=30), animais não infectados (n=7), os quais foram submetidos à avaliação clínico-laboratorial, histopatológico e análise fenotípica por citometria de fluxo da medula óssea. Em um segundo momento, seis cães foram submetidos ao tratamento com alopurinol, na dose de 20mg/kg, via oral, por 90 dias, os quais foram acompanhados do início do tratamento (D0) a 120 dias após o início do tratamento (D120). Análise clínica, laboratorial, parasitológica, mielograma e a análise histopatológica da medula óssea foram realizadas para investigar as modificações ocorridas na medula óssea após o tratamento. Dos cães com LV, as principais alterações clínicas observadas foram: 89% apresentaram linfadenomegalia (35/39), 41% lesões cutâneas (34/39), 38,46% lesões oculares (15/39). Anemia foi observada em 82% (32/39) dos cães, trombocitopenia em 30,78% (12/39), hipergamaglobulinemia em 64,1% (25/39). No exame histopatológico da medula óssea, os cães apresentaram aumento da celularidade, hiperplasia da série mieloide, aumento da relação M:E e aumento de macrófagos na morfometria em animais assintomáticos. Além disso, foi observado um aumento significativo de fibras de reticulina nos cães com LV, sendo em maior intensidade nos animais sintomáticos. Na medula óssea dos cães com LV, também foi observado um aumento significante de macrófagos correlacionados positivamente com a carga parasitária (P=0,009). Pela citometria de fluxo, a intensidade média de fluorescência de MHCII em células CD14+ foi menor nos animais sintomáticos. Nos animais submetidos ao tratamento na avaliação clínica do D0, 100% (6/6) apresentavam linfadenomegalia, 66,7% (4/6) lesões cutâneas e 66,7% (4/6) mucosas hipocoradas. No D120, 100% (6/6) apresentavam linfadenomegalia e 50% (3/6) lesões cutâneas. Na avaliação laboratorial no D0, as alterações marcantes foram anemia em 83,3% (6/5) dos cães e 66,7% (4/6) com hiperproteinemia. No D120, houve recuperação da anemia em 83% dos animais e redução dos níveis de IgG total e das subclasses IgG1 e IgG2. Na avaliação do mielograma no D0, observou-se redução de precursores eosinofílicos (mielócito, metamielócitos e bastonetes) e de metamielócitos neutrófilos. No D120, houve redução de segmentado neutrófilo e aumento de plasmócitos. Em conclusão, alterações na celularidade e fibrose da medula óssea ocorrem em animais naturalmente infectados por L. infantum sendo mais acentuadas em animais sintomáticos. Animais submetidos ao tratamento com alopurinol apresentam melhora clínico-laboratorial e modificações na celularidade avaliada no mielograma. ABSTRACT: Bone marrow is considered one of the target organs for the detection of Leishmania spp. Studies have shown that the presence of the parasite causes relevant changes in hematopoiesis and therefore leading to peripheral cytopenias commonly observed in human and canine patients with visceral leishmaniasis (VL). The aim of the present study was to study the clinical, parasitological and histological aspects of the bone marrow of dogs naturally infected with Leishmania infantum classified as asymptomatic and symptomatic, as well as to evaluate the effect of treatment with allopurinol in the bone marrow and clinical- laboratory of dogs naturally infected by L. infantum. In this context, forty-six dogs classified according to the clinical score were asymptomatic (n = 9), symptomatic (n = 30), non-infected animals (n = 7), which were submitted to clinical-laboratory evaluation , histopathology and phenotypic analysis by flow cytometry of the bone marrow. In a second phase, six dogs were treated with allopurinol at a dose of 20mg / kg orally for 90 days, followed by treatment (D0) at 120 days after treatment (D120) . Clinical, laboratory, parasitological, myelogram and histopathological analysis of the bone marrow were performed to investigate the changes occurred in the bone marrow after the treatment. Of the dogs with LV, the main clinical alterations observed were: 89% had lymphadenomegaly (35/39), 41% had cutaneous lesions (34/39), 38.46% had eye lesions (15/39). Anemia was observed in 82% (32/39) of dogs, thrombocytopenia in 30.78% (12/39), hypergammaglobulinemia in 64.1% (25/39). In the histopathological examination of the bone marrow, the dogs presented increased cellularity, myeloid series hyperplasia, increased M: E ratio and increased macrophages in morphometry in asymptomatic animals. In addition, a significant increase of reticulin fibers was observed in dogs with LV, being more intense in the symptomatic animals. In the bone marrow of dogs with VL, a significant increase of macrophages positively correlated with parasite load (P = 0.009) was also observed. By flow cytometry, the mean MHCII fluorescence intensity in CD14 + cells was lower in symptomatic animals. In the animals submitted to treatment in the clinical evaluation of D0, 100% (6/6) had lymphadenomegaly, 66.7% (4/6) cutaneous lesions and 66.7% (4/6) hypochromic mucous membranes. In D120, 100% (6/6) presented lymphadenomegaly and 50% (3/6) cutaneous lesions. In the laboratory evaluation in the D0, the marked changes were anemia in 83.3% (6/5) of the dogs and 66.7% (4/6) with hyperproteinemia. In D120, anemia was recovered in 83% of the animals and the levels of total IgG and subclasses IgG1 and IgG2 were reduced. In the evaluation of the myelogram at the D0, a reduction of eosinophilic precursors (myelocyte, metamielocytes and rods) and neutrophil metamielocytes was observed. In D120, there was a reduction of the target neutrophil and increase of plasma cells. In conclusion, alterations in cellularity and fibrosis of the bone marrow occur in animals naturally infected by L. infantum being more pronounced in symptomatic animals. Animals submitted to treatment with allopurinol present clinical-laboratory improvement and modifications in the cellularity evaluated in the myelogram. |
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