AVALIAÇÃO PRÉ-CLÍNICA DE UMA FRAÇÃO POLISSACARÍDICA SULFATADA OBTIDA DA ALGA MARINHA GRACILARIA INTERMEDIA (J AGARDH) COMO CANDIDATA A FÁRMACO PARA O TRATAMENTO DE DIARREIAS AGUDAS

Abstract

RESUMO: A crescente procura por moléculas com potencial terapêutico tem despertado interesse cada vez maior por pesquisas científicas envolvendo organismos de origem marinha. Assim, o presente estudo teve como objetivo investigar o potencial terapêutico de uma fração polissacarídica sulfatada extraída da alga marinha Gracilaria intermedia (PLS-Gi) no tratamento de diarreias agudas. Os resultados obtidos a partir da extração, caracterização estrutural e investigação do efeito antidiarreico, antissecretor intestinal e toxicidade aguda da PLS-Gi em camundongos. A fração polissacarídica obtida pelo método de extração enzimática com papaína apresentou bom rendimento e ausência de contaminação por proteínas. A espectroscopia na região do infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) da PLS-Gi revelou a presença de bandas características de agarana, com sulfatação nos C-6 dos resíduos de L-galactose. O pré-tratamento com PLS-Gi (3, 10, 30 mg/kg, v.o) reduziu significativamente as fezes totais e diarreicas, e o enteropooling (p<0,05). A PLS-Gi (30 mg/kg, v.o.) aumentou a Na+/K+ - ATPase gastrointestinal (p<0,05) e reduziu o trânsito intestinal (p<0,05), a partir do bloqueio de receptores colinérgicos, sem interferir no esvaziamento gástrico. No modelo de diarreia induzida pela toxina da cólera (TC), a PLS-Gi diminuiu o fluido intestinal e as perdas de íons Cl- ao interagir com os monossialogangliosídeos (GM1) e a TC (p<0,05). Os resultados obtidos pelo método de difusão em ágar mostraram ausência de zona de inibição nas concentrações de 10, 30 e 50 mg/mL, e sugerem que essas concentrações de PLS-Gi não exercem atividade antibacteriana frente a E.coli. Apesar disso, a PLS-Gi reduziu a diarreia induzida por E. coli enterotoxigênica (ETEC) e preveniu a perda de peso dos animais (p<0,05). Ademais, no estudo da toxicidade oral aguda, os animais não exibiram qualquer sinal de efeito adverso após 14 dias de observação, desse modo, estimou-se que o valor da DL50 para a administração oral de PLS-Gi é maior que 2.000 mg/kg, podendo ser enquadrada na Classe 5 segundo o Globally Harmonized System – GHS, demonstrando limitado potencial de toxicidade aguda. Diante dos resultados apresentados, este estudo evidenciou, pela primeira vez, que a PLS-Gi é capaz de diminuir a motilidade intestinal por meio da ação anticolinérgica, e controlar as diarreias induzidas pela TC e toxina produzida pela ETEC por meio da interação entre PLSToxina- GM1, reduzindo, assim, a perda de íons e fluidos para o lúmen intestinal. Ademais, a biodisponibilidade, o baixo custo e o caráter atóxico, tornam a PLS-Gi uma candidata para o tratamento de diarreias agudas. ABSTRACT: The demand for molecules with therapeutic potential has increasing interest in scientific research involving organisms of marine origin. Thus, the aim of this study was to investigate the therapeutic potential of a sulfated polysaccharide fraction derived from Gracilaria intermedia (PLS-Gi) in the treatment of diarrhea. The chapter I shows the results obtained from the extract, structurally characterize and investigation of the antidiarrheal effect, intestinal antissecretory and acute toxicity of PLS-Gi in mice. PLS-Gi obtained by enzymatic digestion with papain showed good yield and purity after extraction, without contamination by proteins. The Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) of SP-Gi revealed the presence of bands characteristic of agaran with sulphation of C-6 of L-galactosyl residues. Pretreatment with PLS-Gi (3, 10, 30 mg/kg, v.o) reduced total and diarrheal feces, and enteropooling (p<0.05). PLS-Gi (30 mg/kg, v.o) increased the gastrointestinal Na+/K+ - ATPase (p<0.05) and reduced the gastrointestinal transit from anticholinergic mechanisms (p<0.05), without interfering with gastric emptying. In the model of diarrhea induced by cholera toxin (CT), PLS-Gi reduced fluid generation and loss of Cl- by interacting with monosialoganglioside (GM1) and CT (p<0.05). The results obtained by the agar diffusion method showed no inhibition zone at concentrations of 10, 30 and 50 mg/mL, these results suggest that these concentrations of PLS-Gi do not exert antibacterial activity against E.coli. However, PLS-Gi reduced the diarrhea induced by Enterotoxigenic E. coli (ETEC) and prevented weight loss in animals (p<0.05). In addition, in the acute oral toxicity study, animals showed no sign of adverse effect after 14 days of observation, thus the value of LD50 for oral PLS-Gi was estimated to be greater than 2.000 mg/kg and may be classified as Class 5 of Globally Harmonized System – GHS, showing a reduced potential for acute toxicity. Given the results present, this study showed for the first time that PLS-Gi is able to decrease intestinal motility through anticholinergic action and to control diarrhea induced by CT and toxin produced by ETEC through the interaction between PLS- Toxin-GM1, thus, reducing the loss of ions and fluids to the intestinal lumen. In addition, bioavailability, low cost and non-toxic character make PLS-Gi a candidate for the treatment of acute diarrhea.