SELEÇÃO DE GENES DE REFERÊNCIA PARA NORMALIZAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA EM TECIDOS DE CODORNAS

Abstract

RESUMO: A coturnicultura de corte está em crescente desenvolvimento e necessita de maiores estudos no campo genético para o direcionamento produtivo. Sendo a técnica da PCR em tempo real (RT-qPCR) uma das mais importantes na análise da expressão gênica, estudos e, experimentações relacionadas a seus componentes se fazem necessários. Dentre esses componentes encontra-se o gene de referência, normalizador de dados que possui impacto nos resultados e tem influência direta no sucesso da análise, devendo este possuir expressão significativa no tecido de forma invariável em todas as condições experimentais. Desse modo, objetivou-se determinar o perfil de transcritos expressos de genes de referência em tecidos sólidos de codorna de corte. Foram analisadas a estabilidade de dez genes constitutivos (ACTA1, ACTB, B2M GAPDH,HMBS, HPRT1, SDHA, MRPS27, MRPS30 e RPL5) no músculo do peito, gordura abdominal, fígado e intestino entre os grupos macho e fêmea, a partir dos programas BestKeeper, NormFinder, geNorm e método ΔCt, gerados pela ferramenta online RefFinder. Observou-se que o HPRT1 foi o mais estável em todos os tecidos analisados, seguindo por MRPS30 no peito, B2M na gordura abdominal, HMBS no fígado e RPL5 no intestino.Houve efeito do sexo na estabilidade dos genes testados, sendo que os genes mais estáveis para os animais machos foram: HPRT1, MRPS30,SDHA e, para fêmeas os genes RPL5, HPRT1, MRPS30.Estes resultados podem ajudar em ensaios de RT-qPCR que avaliem estes tecidos de codornas machos ou fêmeas, uma vez que fornece dados sobre quais genes são mais estáveis e podem ser testados como candidatos a genes de referência em futuras analisem por RT-qPCR em condições semelhantes. ABSTRACT: The production of meat quails for is increasing development and needs further studies in the genetic field for productive direction. As the real time PCR technique (RT-qPCR) isone of the most important in analysis of animal gene expression studies and trials related to its components are needed. Among these components is the reference gene, normalizador gene, which has great impact on the results and has direct influence on the success of the analysis, which must have significant expression in tissue invariably in all experimental conditions. Thus, the aim of this study was to evaluate reference genes for quantitative real-time PCR in European quail. There were analyzed the stability of ten constitutive genes (ACTA1, ACTB, B2M GAPDH, HMBS, HPRT1, SDHA, MRPS27, MRPS30 e RPL5) onpectoralis muscle, abdominal fat, liver and intestine through BestKeeper, NormFinder, geNormprograms and ΔCt method, generated by online RefFindertool. It was observed that the HPRT1 was the most stable in all tissues analyzed, followed by MRPS30 in pectoralis muscle, the B2M in abdominal fat, HMBS in the liver and RPL5 in intestine tissue. There wassex effect on the stability of the tested genes, and the most stable genes for male animals were HPRT1, MRPS30, SDHA and for females,RPL5 ,HPRT1,MRPS30 genes were the most.These results may help in RT-qPCR to assess these tissues male or female quail tests, since it provides information about which genes are more stable and can be tested as candidate reference genes in future analyze by RT-qPCR under conditions like.