ANÁLISES FITOQUÍMICA E FARMACOLÓGICA DAS ESPÉCIES Eugenia dysenterica DC. (Cagaiteira) e Annona crassiflora Mart. (Araticunzeiro) DIRECIONADAS PARA DOENÇAS NEURODEGENERATIVAS.

Abstract

RESUMO: A biodiversidade brasileira, em especial no Bioma Cerrado é uma fonte promissora de substâncias químicas bioativas para o desenvolvimento de novos fármacos direcionados para as doenças neurodegenerativas com aspectos fitoquímicos, farmacológicos e terapêuticos desconhecidos. Neste contexto, selecionou-se as espécies Eugenia dysenterica DC. e a Annona crassiflora Mart. para isolamento e identificação de inibidores da acetilcolinesterase (AChE), enzima relacionada a doença de Alzheimer (DA). Os estudos com a espécie E. dysenterica consistiu em análises da atividade antioxidante e detecção de inibidores da AChE a partir da obtenção dos seus óleos essenciais (OE). O óleo essencial da cagaita (OEC) foi obtido utilizando-se o sistema de hidrodestilação, tipo Clevenger e posterior identificação e caracterização do OEC por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM). Realizou-se ensaios antioxidantes com o OEC, baseados na formação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), radical hidroxila (·OH) e produção de óxido nítrico (NO·). Para a espécie A. crassiflora elaborou-se extratos hexânico (EH) e metanólico (EM) da folhas, sendo estes submetidos à extração ácido-base objetivando-se a extração de alcaloide e elaboração do extrato da polpa dos Frutos (EAFt). Utilizou-se técnicas de cromatografia em coluna (CC), cromatografia em camada delgada (CCD), RMN 1H e RMN 13C, na tentativa de isolamento e elucidação estrutural de substâncias isoladas de A. crassiflora. A avaliação do potencial anticolinesterásico foi realizada seguindo-se a metodologia descrita por Ellman (1961) e adaptado por Rhee (2001) que detecta inibidores da AChE para ambos os materiais vegetais. Observou-se a partir do ensaio de Ellman que OEC foi capaz de inibir a AChE com um valor de CI50 =0,916 ug.mL-1 (p <0,05) sendo um valor promissor comparando-se com o medicamento neostigmina (CI50 = 1,87 μg.mL-1), um medicamento amplamente utilizado na terapia da DA. Nas concentrações testadas foi observado que OEC preveniu a peroxidação lipídica, inibindo a quantidade de TBARS formado, de maneira semelhante ao ácido ascórbico. Além disso, houve uma redução na produção de •OH, assim como a produção de NO•. A extração de alcaloides, por maceração, das folhas e a elaboração de EAFt de A. crassiflora apresentou os seguintes rendimentos: EH= 1,74%, EM= 32,47% e EAFt= 0,54%. Observou-se a presença de alcaloides nos extratos quando utilizado o reagente de Dragendorf. Os extratos das folhas e frutos apresentaram resultados positivos para os testes de inibição qualitativos e quantitativos da AChE. Das folhas e frutos de A. crassiflora foram isolados três compostos puros e misturas, que após caracterização por espectroscopia de RMN foram identificados como: A05, FAH-1, FAH-2, um flavonol (Miricetina-3’,5’-dimetoxi-4’-isopropoxi-3-O-raminosídeo), uma mistura de sesquiterpenos (β-Sitosterol, estigmasterol e 24-metilenocicloartanol) e o β-Sitosterol puro, respectivamente. Nenhum dos compostos isolados da A. crassiflora apresentaram inibição significativa da enzima AChE. A análise do OEC por CG/EM permitiu identificar seis constituintes, sendo o óxido de cariofileno o majoritário com (66,37%). Conclui-se que as espécies E. dysenterica e A. crassiflora apresentaram promissores resultados in vitro o que é motivador para ensaios in vivo. ---------------------- ABSTRACT: The Brazilian biodiversity, in particular Cerrado is a promising source of bioactive chemical substances for the development of new drugs targeted for neurodegenerative diseases with phytochemicals, pharmacological and therapeutic unknown aspects. In this context, the species Eugenia dysenterica DC. (Cagaiteira) and Annona crassiflora Mart.(Araticum) were selected for identification and isolation of inhibitors for the acetylcholinesterase (AChE), enzyme related with the Alzheimer disease (AD). Studies with E. dysenterica specie consisted of analyzes of the antioxidant activity and detection of AChE inhibitors from their essential oils (OE). The OECwas obtained by using a hydrodistillation Clevenger system type and subsequent identification and characterization by gas chromatography coupled with a mass spectrometer (GC-MS). Antioxidant assay was performed with OEC based on the formation of reactive substances to thiobarbituric acid (TBARS), hydroxyl radical (•OH) and nitric oxide production (NO).For the A. crassiflora specie was prepared hexane (HE) and methanol (ME) extracts from its leaves, being subjected to acid-base extraction aiming to the alkaloid extraction and the elaboration of the fruit pulp extract (EAFt). Column chromatography (CC), thin layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC), 1H NMR and 13C NMR was used in an attempt to isolate and structural elucidation of the isolated substances from A. crassiflora.The evaluation of anticholinesterase potential was realized following the methodology described by Ellman (1961) adapted by Rhee (2001) which detect AChE inhibitors for both plant materials. It was observed from the Ellman test that OEC was able to inhibit the AChE with a value of CI50 =0.916 ug.mL-1 (p <0.05) being a promising value comparing with the drug neostigmine (CI50 = 1.87 μg.mL-1), an enlargement drug used in AD therapy. At the concentrations tested the OEC prevented the lipid peroxidation, Inhibiting the amount of TBARS formed, similarly to ascorbic acid. In addition, there was a reduction in the production of •OH, just like the production of NO. The extraction of alkaloids by maceration of leaves of A. crassiflora presented the following income: HE= 1.74%, ME=32.47% and EAFt= 0.54%. It was observed the presence of alkaloidsin the extracts when used the Dragendorf reagent. The extract of the leaves and fruits presented positive results for the qualitative and quantitative inhibition tests of AChE inhibition. From the leaves and fruits of A. crassiflora, three pure compounds and mixtures were isolated, which after characterization by NMR spectroscopy were identified as: A05, FAH-1, FAH-2, (Miricetin-3 ', 5'-dimethoxy- 4'-isopropoxy-3-O-raminoside) flavonol, a mixture of sesquiterpenes (β-Sitosterol, stigmasterol and 24-methylenecycloartanol) and pure β-Sitosterol, respectively. None of the compounds this A. crassiflora showed inhibition of the enzyme AChE. The analysis of the OEC by GC / MS allowed to identify six constituents, with caryophyllene oxide being the majority with (66.37%). It is concluded that the species E. dysenterica and A. crassiflora presented promising results in vitro which is motivating for in vivo assays.