CARACTERIZAÇÃO FITOQUÍMICA, ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANA DA FRAÇÃO DIALISÁVEL DO LÁTEX DE PLUMERIA PUDICA (JACQ., 1760)

Abstract

RESUMO: O látex é um fluido produzido por células vegetais chamadas de laticíferos. É constituído por uma fase sólida, chamada de borracha, e por uma fase líquida onde se encontra uma ampla variedade de compostos como carboidratos, ácidos orgânicos, metabólitos secundários e proteínas. Diversos metabólitos secundários já foram identificados em látex de plantas e são frequentemente descritos por apresentarem propriedades antioxidantes e antimicrobianas. Estudos recentes demonstraram o potencial farmacológico das proteínas do látex de Plumeria pudica. Porém, não existem estudos na literatura sobre a caracterização dos compostos secundários nesta espécie. Neste sentido, a presente pesquisa tem por objetivo caracterizar os compostos fitoquímicos e verificar a atividade antioxidante e antimicrobiana da fração dialisável do látex de P. pudica. O látex de P. pudica foi coletado na cidade de Parnaíba-PI e submetido a fracionamento por meio de centrifugação e diálise contra água destilada por uma hora utilizando membranas com ponto de corte de 8.000 Da. A fração não retida pela membrana de diálise, chamada de fração dialisável de P. pudica (DLPp), foi liofilizada e utilizada nos experimentos. Foram realizados os seguintes ensaios para caracterização fitoquímica da DLPp: pesquisa de fenóis, taninos, flavonoides, esteroides, triterpenoides, saponinas, alcaloides e açúcares redutores; quantificação dos teores de fenóis e flavonoides por meio de espectrofotometria e análise das frações de DLPp por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). A atividade antioxidante da DLPp foi determinada através dos métodos de redução do radical DPPH e de quelação do íon ferroso. Já a atividade antimicrobiana foi verificada através da técnica de microdiluição em caldo contra os fungos Candida albicans ATCC 48189, Candida krusei ATCC 6258, Cryptococcus parapsilosis ATCC 22019, Fonsecaea pedrosoi ATCC 46422, Trichophyton interdigitale ATCC 73727, Sporothrix brasiliensis ATCC 16042, Aspergillus fumigattus ATCC 130473 e as bactérias Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Staphylococcus aureus ATCC 29213 e Escherichia coli ATCC 25922. Os resultados da presente pesquisa são descritos a seguir. O rendimento de DLPp foi de 11 % da massa total do látex de P. pudica. O espectro ultravioleta do extrato aquoso de DLPp apresentou duas bandas: uma banda I entre 300-340 nm e uma banda II entre 220-260 nm. A prospecção fitoquímica revelou a presença de flavonoides na DLPp. O teor de fenóis totais foi de 34,41 ± 0,12 mg EAG/g de DLPp e o teor de flavonoides totais foi de 1,22 ± 0,12 mg EQ/g de DLPp. A análise por CLAE sugeriu que a fração hidrometanólica de DLPp tem perfil semelhante ao padrão rutina. A DLPp mostrou moderada atividade antioxidante apresentando CE50 de 106,98 ± 4,1 μg/mL no ensaio de redução do radical DPPH. No ensaio de quelação do íon ferroso, a DLPp mostrou CE50 de 1,37 ± 0,05 mg/mL. A DLPp não inibiu o crescimento de nenhum dos microrganismos testados. Este estudo sugere a presença de flavonoides na DLPp e que esta apresenta moderada atividade antioxidante. ABSTRACT: Latex is a fluid produced by plant cells called laticifers. It consists of a solid phase, called rubber, and a liquid phase where a wide variety of compounds such as carbohydrates, organic acids, secondary metabolites and proteins are found. Several secondary metabolites have already been identified in plant latex and are often described as having antioxidant and antimicrobial properties. Recent studies have demonstrated the pharmacological potential of Plumeria pudica latex proteins. However, there are no studies in the literature on the characterization of secondary compounds in this species. In this sense, the present research aims to characterize the phytochemical compounds and to verify the antioxidant and antimicrobial activity of the dialysable fraction of P. pudica latex. The latex of P. pudica was collected in the city of Parnaiba-PI and subjected to fractionation by means of centrifugation and dialysis against distilled water for one hour using membranes with cut-off point of 8,000 Da. The fraction not retained by the dialysis membrane, called of dialysable fraction of P. pudica (DLPp), was lyophilized and used in the experiments. The following tests were carried out for the phytochemical characterization of DLPp: research on phenols, tannins, flavonoids, steroids, triterpenoids, saponins, alkaloids and reducing sugars; quantification of phenol and flavonoid contents by means of spectrophotometry and analysis of DLPp fractions by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The antioxidant activity of DLPp was determined by the DPPH radical reduction and the ferrous ion chelating methods. The antimicrobial activity was verified by means of the microdilution in broth compared to fungi Candida albicans ATCC 48189, Candida krusei ATCC 6258, Cryptococcus parapsilosis ATCC 22019, Fonsecaea pedrosoi ATCC 46422, Trichophyton interdigitale ATCC 73727, Sporothrix brasiliensis ATCC 16042, Aspergillus fumigattus ATCC 130473 and to the bacteria Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Staphylococcus aureus ATCC 29213 and Escherichia coli ATCC 25922. The results of the present research are described below. The DLPp yield was 11 % of the total mass of P. pudica latex. The ultraviolet spectrum of the aqueous extract of DLPp showed two bands: a band I at 300-340 nm and a band II at 220-260 nm. Phytochemical prospecting revealed the presence of flavonoids in DLPp. The total phenol content was 34,41 ± 0,12 mg EAG/g de DLPp and the total flavonoid content was 1,22 ± 0,12 mg EQ/g de DLPp. Analysis by HPLC suggested that the hydromethanolic fraction of DLPp has a profile like the standard rutine. DLPp showed moderate antioxidant activity with CE50 de 106,98 ± 4,1 μg/mL in the DPPH radical reduction assay. In the ferrous ion chelating assay, DLPp showed CE50 of 1,37 ± 0,05 mg/mL. DLPp did not inhibit the growth of any of the microorganisms tested. This study suggests the presence of flavonoids in DLPp and that this has moderate antioxidant activity.